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PCR仪实验技术需要准备什么?

信息来源:数字pcr仪_荧光定量pcr仪_金属浴_核酸提取仪_基因扩增仪_石家庄奥龙科技有限公司    2018-10-11

  PCR仪在医疗上的应用逐渐广泛,今天核酸提取仪厂家给大家分享一下PCR仪实验技术需要准备什么?

  1.试剂和溶液

  (1)10 × PCR缓冲液

  500 mM 氯化钾

  100 mM Tris-Cl (室温时pH 8.3)

  15 mM 氯化镁

  (2)10 mM脱氧三磷酸核苷(dNTPs) 溶液-含有所有四种dNTPs(pH 8.0)

  (3)耐热的DNA 聚合酶:

  ① Taq DNA 聚合酶是从表达克隆嗜热水生菌的DNA 聚合酶基因的大肠杆菌提纯而来。此酶有5’→3’ DNA聚合酶和5’→3’外切酶活性,但是缺乏3’→5’ 外切酶活性。此酶由分子量约为94 千道尔顿的多肽组成。Taq DNA聚合酶对热稳定,能在较高的温度下利用引物将单链模板合成为DNA。 催化一典型的PCR所需酶量约为2单位。加酶量过多则有可能导致非靶序列的扩增。

  Taq DNA 聚合酶缺乏校正功能,在PCR过程中核苷酸掺入错误率可达每循环2 × 10-4个核苷酸,约比使用大肠杆菌DNA聚合酶 I 的Klenow片段时高4倍。对于一个30轮循环的扩增反应来说,这一掺入错误率将导致0.25%的总错误频率。这一频率似随和浓度的升高而增大。这些错误的掺入可以发生在扩增产物的任何位置,既有颠换也有转换(但并无长的缺失、嵌合或插入)。

  单位的定义:一单位是指于74oC将l0 nmol的脱氧核糖核苷酸30分钟内掺入到酸性沉淀的物质中。其实验条件是:25 mM TAPS (pH9.3), 50 mM 氯化钾, 2 mM 氯化镁, 1 mM DTT, 0.5 mg/ml 有活性的鲑鱼精液DNA, 0.2 mM dATP, dCTP, dGTP, dTTP。

  ② rTth DNA聚合酶是Thermus thermophilus(Tth)和Thermococcus litoralis(Tli)两种菌中耐热DNA聚合酶的混合。这种混合酶特别具有5’→3’DNA 聚合酶和3’→5’外切酶(校正)的双重活性。当按推荐量使用时,此酶可提高保真度及长链PCR的产量。

  常规PCR扩增靶DNA序列一般在5 kb以内。而rTth DNA 聚合酶可从人类基因组DNA中扩增至19.6 kb的β-球蛋白基因群和噬菌体λDNA的42 kb的片段。

  (4)琼脂糖凝胶

  (5)10 μM的上游和下游引物

  (6)DNA模板

  (7)对照DNA(含有靶序列的DNA)

  (8)DNA长度标准参照物

  2.设备

  (1)0.2 ml PCR扩增管

  (2)可预先设定扩增方案的温度循环器(PCR仪)

  以上就是核酸提取仪厂家给大家分享PCR仪实验技术需要准备的材料,希望对大家有帮助,想要了解更多相关内容,可以观看本站其他文章,如需转载请注明出处。

PCR仪

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